Serum prevalence of anti-Trypanosoma vivax antibodies in cattle in Tapira-MG, Brazil / Soroprevalência de anticorpos anti-Trypanosoma vivaxem bovinos em Tapira-MG, Brasil

Trypanosoma vivax is considered the most important pathogenic Trypanosoma for cattle and causes great damage to the dairy and beef cattle industries. This study aimed to evaluate the prevalence of anti-T. vivax antibodies in dairy cattle from the municipality of Tapira, located in the Alto Paranaíba region, Minas Gerais, Brazil. The 74 blood serum samples from dairy cattle were analyzed using an indirect immunofluorescence reaction. The seroprevalence was 82.4 % (61/74), and the highest incidence observed can be correlated with the transit of untested animals, the presence of vectors, and needle sharing by owners. The data allowed defining Tapira as an area of expansion of T. vivax epizootic infections in the state of Minas Gerais.

O Trypanosoma vivax é considerado o mais importante trypanosoma patogênico para bovinos e causa grandes prejuízos na pecuária de corte e leite. Este estudo teve como objetivo avaliar a prevalência anticorpos de anti-Trypanosoma vivax em bovinos leiteiros do município de Tapira, localizado na região do Alto Paranaíba, Minas Gerais, Brasil. As 74 amostras de soro sanguíneo de bovinos leiteiros foram analisadas por meio de reação de imunofluorescência indireta. A soroprevalência foi de 82,4% (61/74), que pode estar relacionada ao trânsito de animais não testados, presença de vetores e compartilhamento de agulhas pelos proprietários. Os dados permitiram definir Tapira como uma área de expansão das infecções epizoóticas por Trypanosoma vivax no estado de Minas Gerais.

Evaluation of techniques for diagnosis of Trypanosoma vivax infections in naturally infected cattle in the Zona da Mata Mineira / Avaliação de técnicas para diagnóstico de infecções por Trypanosoma vivax em bovinos naturalmente infectados na Zona da Mata Mineira

Abstract This study aimed to evaluate diagnostic techniques for trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, in naturally infected cattle in Minas Gerais, Zona da Mata. The deaths of six lactating cows with similar clinical conditions—characterized by hyporexia, hypogalactia, and recumbency—had been reported from one property. Initially, two animals were examined and diagnosed with trypanosomiasis through identification of the protozoan in a blood smear. After the initial diagnosis, all lactating cows (n=37) on the property were examined, and blood samples were collected for tests including whole blood smear, buffy coat smear, Woo's technique, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and polymerase chain reaction (PCR). Woo's test, buffy coat smears, and whole blood smears indicated that 4/37 (10.81%) animals were positive for trypanosomiasis, whereas ELISA and PCR indicated that 33/37 (89.19%) and 27/37 (72.97%) animals, respectively, were positive. The agreement obtained between parasitological techniques was classified as high, while between ELISA and PCR, no agreement. In conclusion, parasitological techniques have a low capacity to identify infected animals in the chronic stage of T. vivax infection. Therefore, techniques such as PCR and/or ELISA should be used to minimize the occurrence of false negatives.

Resumo Este estudo objetiva avaliar as técnicas de diagnóstico da tripanossomíase, causada pelo Trypanosoma vivax, em bovinos naturalmente infectados, em Minas Gerais, Zona da Mata. A morte de seis vacas em lactação com condições clínicas semelhantes - caracterizadas por hiporexia, hipogalaxia e decúbito - foi relatada em uma propriedade. Inicialmente, dois animais foram examinados e diagnosticados com tripanossomíase através da identificação do protozoário em esfregaço sanguíneo. Após o diagnóstico inicial, todas as vacas em lactação (n = 37) na propriedade foram examinadas, e amostras de sangue foram coletadas para testes, incluindo esfregaço de sangue total, esfregaço de capa leucocitária, técnica de Woo, ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). O teste de Woo, os esfregaços de capa leucocitária e de sangue total indicaram que 4/37 (10,81%) animais foram positivos para tripanossomíase, enquanto ELISA e PCR indicaram que 33/37 (89,19%) e 27/37 (72,97%) animais, respectivamente, foram positivos. A concordância entre técnicas parasitológicas foi classificada como alta, enquanto entre ELISA e PCR, sem concordância. As técnicas parasitológicas apresentam baixa capacidade para identificar animais infectados na fase crônica da infecção por T. vivax. Dessa forma, técnicas como PCR e/ou ELISA devem ser utilizadas para minimizar a ocorrência de falsos negativos.

Detection of Trypanosoma vivax in tissues of experimentally infected goats: what is the role of adipose tissue in the life cycle of this protozoon? / Detecção de Trypanosoma vivax em tecidos de caprinos experimentalmente infectados: qual é o papel do tecido adiposo no ciclo de vida desse protozoário?

Abstract Trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, is responsible for great economic losses among livestock in Africa and South America. During the life cycle of these parasites, they may present different morphological, metabolic and physiological characteristics depending on the interactions that are encountered at each point of their life cycle. Although T. vivax is frequently reported in the circulation of its mammalian hosts, it has the ability to migrate to the tissues of these individuals. However, this characteristic is poorly understood. In this context, we aimed to investigate the presence of T. vivax and the changes caused in different tissues of experimentally infected goats. Despite the animals were not perfused before tissues collection, using different approaches, we demonstrated its presence in different samples, including in the adipose tissue and skin of infected animals. In addition, a mononuclear inflammatory reaction, mostly characterized by an infiltrate of lymphocytes, plasma cells and macrophages were observed. The results highlight the possibility that, like other trypanosomatids, T. vivax may use these tissues during its life cycle. Future studies aiming to elucidate the length of time for which T. vivax remains active in these sites, and whether it uses these sites as a refuge from trypanocidal drugs, and whether it is capable of recolonizing the blood circulation, are much needed.

Resumo A tripanossomíase, causada por Trypanosoma vivax, é responsável por grandes perdas econômicas na bovinocultura da África e da América do Sul. Durante seu ciclo de vida, o parasita pode apresentar diferentes características morfológicas, metabólicas e fisiológicas em função das interações que ele encontra em cada ponto do seu ciclo. Embora o T. vivax seja reportado, frequentemente, na circulação dos seus hospedeiros mamíferos, o protozoário tem a capacidade de migrar para os tecidos desses indivíduos. Entretanto, essa característica é pobremente conhecida. Neste contexto, o objetivo foi verificar a presença, assim como as alterações causadas pelo T. vivax nos diferentes tecidos de caprinos experimentalmente infectados. Apesar dos animais não terem sido perfundidos antes da coleta dos tecidos, utilizando-se diferentes abordagens, foi evidenciada a presença do T. vivax em diferentes amostras teciduais, incluindo no tecido adiposo e pele dos animais infectados. Além disso, foi observada reação inflamatória mononuclear, caracterizada majoritariamente por infiltrado de linfócitos, plasmócitos e macrófagos. Os resultados evidenciam a possibilidade de que, assim como outros tripanossomatídeos, T. vivax pode usar esses tecidos durante o seu ciclo de vida. São necessários futuros estudos, objetivando elucidar o período em que o T. vivax permanece ativo nesses sítios, se ele utiliza esses locais como refúgio das drogas tripanocidas, e se ele é capaz de recolonizar a circulação sanguínea.

Follow-up of dairy cattle naturally infected by Trypanosoma vivax after treatment with isometamidium chloride / Acompanhamento de bovinos leiteiros naturalmente infectados com Trypanosoma vivax após tratamento com cloreto de isometamidium

Abstract Trypanosoma vivax infections cause nonspecific clinical signs in cattle associated with aparasitemic intervals, making disease diagnosis a challenge. In Brazil, diminazene aceturate and isometamidium chloride (ISM) are available to treat bovine trypanosomosis. The objective of this study was to follow-up, by molecular and serological techniques, dairy cattle naturally infected by T. vivax after ISM treatment. Thirty cattle naturally infected with T. vivax received two applications of ISM, at a dosage of 1.0 mg/kg intramuscularly, on days 0 and 150. For T. vivax diagnosis, EDTA-blood and serum samples were evaluated on 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, and 240 days after treatment PCR, Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and ELISA. Animals with persistent detection of T. vivax DNA by both PCR and LAMP were found and continuous detection of anti-T. vivax IgG antibodies by ELISA, suggesting the presence of T. vivax resistance to ISM. The combination of LAMP and ELISA tests can prevent misdiagnosis of the parasite clearance in treated cattle, contributing to better disease control. This is the first experiment that demonstrates the persistence infection of T. vivax under ISM treatment in a natural infected herd and evidence of ISM chemotherapy-resistant T. vivax in Brazil.

Resumo Em bovinos, infecções por Trypanosoma vivax geram sinais clínicos inespecíficos que, associados a intervalos aparasitêmicos, faz com que o diagnóstico da enfermidade seja desafiador. No Brasil, somente aceturato de diaminazeno e cloridrato de isometamidum (ISM) estão disponíveis para o tratamento da tripanossomose bovina. Este trabalho teve como objetivo acompanhar bovinos leiteiros naturalmente infectados por T. vivax, após o tratamento com ISM por meio de técnicas moleculares e sorológica. Foram utilizados 30 bovinos naturalmente infectados com T. vivax, sendo estes tratados com duas aplicações de ISM, na dosagem de 1,0 mg/kg por via intramuscular profunda, nos dias 0 e 150. Foram avaliadas, para diagnóstico de T. vivax, amostras de sangue acrescido de EDTA e soro, colhidas nos 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 dias após os tratamentos pela reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificação circular isotérmica do DNA (LAMP) e ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA). Verificou-se a presença de animais com persistência na detecção de DNA de T. vivax pela PCR e LAMP, bem como detecção contínua de anticorpos IgG anti-T. vivax pelo método de ELISA, sugerindo a presença de resistência de T. vivax ao ISM. A combinação dos testes LAMP e ELISA pode evitar falsos diagnósticos da eliminação do parasita nos bovinos tratados, contribuindo para um melhor controle da doença. Este é o primeiro experimento que demonstra infecção persistente do T. vivax em rebanho naturalmente infectado, tratado com ISM, e evidencia possível resistência ao quimioterápico no Brasil.

Comparison of conventional and molecular techniques for Trypanosoma vivax diagnosis in experimentally infected cattle / Comparação de técnicas convencionais e moleculares para diagnóstico em bovinos experimentalmente infectados por Trypanosoma vivax

Abstract Livestock infections by Trypanosoma vivax have been occurring with increasing frequency, mainly due to the presence of animals with subclinical infections and without apparent parasitaemia, making diagnosis challenging. The aim of the present study was to evaluate several techniques used for T. vivax diagnosis in order to assess the best way of using them during the course of the disease. Molecular methods demonstrated higher rates of detection than parasitological methods, detecting 33 of the 54 (61.1%) known positive samples, while the hematocrit centrifugation technique (best parasitological test) detected only 44.4%. The serological methods, IFAT and ELISA, detected seropositivity in 51 of the 54 (94.4%) and 49 of the 54 (90.7%) known positive samples, respectively. Despite being highly sensitive, the latter only demonstrates exposure to the infectious agent and does not indicate whether the infection is active. The present study was the first to use the qPCR for a South American isolate, improving disease detection and quantification. Furthermore, the analyses revealed that the patent phase of the disease may extend up to 42 days, longer than previously reported. The combination of several diagnostic techniques can lower the frequency of false negative results and contributes toward better disease control.

Resumo Infecções por Trypanosoma vivax têm ocorrido com frequência crescente em animais de produção, principalmente pela aquisição de animais com infecções subclínicas e sem aparente parasitemia, o que dificulta o diagnóstico. O objetivo do presente estudo foi avaliar várias técnicas empregadas para o diagnóstico de T. vivax, a fim de verificar a melhor maneira de utilizá-las durante o curso da doença. Os métodos moleculares demonstraram maiores taxas de detecção que os métodos parasitológicos, detectando 33 das 54 (61,1%) amostras sabidamente positivas, enquanto a técnica de hemoconcentração (melhor teste parasitológico) detectou apenas 44,4%. Os métodos sorológicos, RIFI e ELISA, detectaram soropositividade em 51 das 54 (94,4%) e 49 das 54 (90,7%) amostras sabidamente positivas, respectivamente. Apesar de serem altamente sensíveis, estes testes apenas demonstram a exposição ao agente infeccioso, e não indicam se a infecção permanece ativa. O presente estudo foi o primeiro a utilizar a qPCR para um isolado sul-americano, melhorando sua detecção e quantificação. Além disso, as análises revelaram que a fase patente da doença pode se estender por até 42 dias após a infecção, sendo maior que anteriormente relatado. A combinação de várias técnicas de diagnóstico pode evitar a frequência de resultados falso-negativos e contribuir para um melhor controle da doença.

Coxiella burnetii associated with BVDV (Bovine Viral Diarrhea Virus), BoHV (Bovine Herpesvirus), Leptospira spp, Neospora caninum, Toxoplasma gondii and Trypanosoma vivax in reproductive disorders in cattle / Coxiella burnetii associada ao BVDV (Vírus da Diarreia Viral Bovina), BoHV (Vírus do Herpes Bovino), Leptospira spp, Neospora caninum, Toxoplasma gondii e Trypanosoma vivax em distúrbios reprodutivos em bovinos

Abstract This is a cross-sectional study to assess the presence of antibodies in ruminants against selected pathogens associated with reproductive disorders in cattle in four Brazilian states, including the zoonotic agent Coxiella burnetii. The used tests were Virus Neutralization Assay for IBR and BVD, Microscopic Agglutination Test for Leptospira spp., Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for C. burnetii and Toxoplasma gondii, and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Neospora caninum and Trypanosoma vivax. Seropositivity for C. burnetii was 13.7% with titers from 128 to 131,072; 57.8% for BoHV-1, with titers between 2 and 1,024; 47.1% for BVDV-1a, with titers from 10 to 5,120; 89.2% for N. caninum; 50% for T. vivax; and 52.0% for Leptospira spp., with titers between 100 to 800 (the following serovars were found: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona and Icterohaemorrhagiae); 19.6% for T. gondii with titer of 40. This is the first study that has identified C. burnetii in cattle associated with BoHV and BVDV, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii and T. vivax. Thus, future studies should be conducted to investigate how widespread this pathogen is in Brazilian cattle herds.

Resumo Este é um estudo transversal para avaliar a presença de anticorpos em ruminantes contra patógenos selecionados e associados a distúrbios reprodutivos em bovinos de quatro estados brasileiros, incluindo o agente zoonótico Coxiella burnetii. Os testes utilizados foram Teste de Vírus-Neutralização para BoHV e BVDV, teste de Aglutinação Microscópica para Leptospira spp., Reação de Imunofluorescência Indireta for C. burnetii e Toxoplasma gondii, e Ensaio de Imunoabsorção Enzimática para Neospora caninum e Trypanosoma vivax. A soropositividade para C. burnetii foi de 13,7% com títulos de 128 a 131.072; 57,8% para BoHV-1, com títulos entre 2 a 1.024; 47,1% para BVDV-1a, com títulos de 10 a 5.120; 89,2% para N. caninum; 50% para T. vivax; e 52,0% para Leptospira spp., com títulos entre 100 a 800 (sorovares encontrados: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona e Icterohaemorrhagiae) 19,6% para T. gondii com título de 40. Este é o primeiro estudo que evidencia a participação de C. burnetii em bovinos associada ao Vírus da Rinotraqueíte bovina infecciosa e da diarreia viral bovina, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii e T. vivax em bovinos. Desta forma, futuros estudos devem ser conduzidos a fim de investigar o quão disseminado se encontra este patógeno em rebanhos bovinos brasileiros.

Epizootic Infection by Trypanosoma vivax in Cattle from the State of Minas Gerais, Brazil

Trypanosomiasis is caused by a pathogenic protozoan of the genus Trypanosoma, being Trypanosoma vivax the most important agent for cattle. The aim of the present study was to demonstrate the expansion of T. vivax infection in different mesoregions of Minas Gerais, Brazil, and describe the clinicopathological findings of trypanosomiasis in cattle. The diagnosis was based on visualization of the parasite in blood smears and DNA detection of T. vivax in the blood of live cows and tissues of necropsied animals by the polymerase chain reaction (PCR). Thirty suspected herds were tested, of which 11 were positive for T. vivax. The most frequent clinical signs were anemia, apathy, drop in milk production, weight loss, reproductive disorders, and nervous signs. Concomitant diseases, such as malignant edema, pneumonia and increased cases of mastitis were associated with T. vivax infection. Three cows were necropsied and the most significant findings were low body condition score, pale mucous and spleen with white pulp hyperplasia. The results demonstrated the expansion of T. vivax infection in Minas Gerais, that PCR-associated blood smears are promising for diagnosis, and that other diseases often occur concomitantly to T. vivax infection in regions with trypanosomiasis in cattle.

Aspectos clínicos, epidemiológicos e diagnóstico da infecção por Trypanosoma vivax em rebanho bovino no estado do Maranhão / Clinical and epidemiological aspects and diagnosis of Trypanosoma vivax infection in a cattle herd, state of Maranhão, Brazil

O objetivo desse estudo foi investigar a ocorrência de tripanossomose em uma propriedade leiteira no município de Timon no estado do Maranhão, Brasil. O proprietário relatava histórico de abortos, nascimentos de crias fracas e mortalidade de animais adultos com perda progressiva de peso. Foram realizadas visitas à propriedade para obtenção do histórico, exame dos animais e coleta de sangue para realização do teste de Woo, hemogramas, testes sorológicos para pesquisa de anticorpos contra tripanossomose, leptospirose, e neosporose e PCR para diagnóstico molecular de Trypanosoma vivax. A identificação de animais com baixos valores no hematócrito foi a principal alteração hematológica identificada no rebanho. Dois animais foram positivos no teste de Woo, sendo visualizados tripanossomas em esfregaços sanguíneos, confirmados por meio de diagnóstico molecular como sendo T. vivax. Identificou-se que 95,23% (40/42) dos animais com hematócrito baixo foram sorologicamente positivos para T. vivax. As condições identificadas na propriedade, como ambiente propício aos vetores mecânicos, a presença de animais silvestres e a introdução de animais de estados onde já haviam sido registrados surtos de tripanossomose provavelmente estiveram associadas à introdução e disseminação do agente no rebanho. O elevado número de animais sorologicamente positivos para tripanossomose 82,51% (151/183) demonstra que praticamente todo o rebanho teve contato com o agente. O rápido estabelecimento das medidas de controle, entre elas a utilização das drogas tripanocidas, contribuiu para o controle do surto. O estudo permitiu comprovar a ocorrência de mais um surto de tripanossomíase tripanossomose no Brasil. O diagnóstico clínico da enfermidade foi dificultado pela semelhança dos sinais clínicos com outras enfermidades e pela possibilidade da associação de duas ou mais doenças no mesmo paciente, o que ressalta a importância do estabelecimento de medidas diagnósticas adequadas como forma de evitar a disseminação da enfermidade e minimizar as perdas econômicas dos produtores.(AU)

The objective of this study was to investigate the occurrence of trypanosomiasis in a dairy farm in municipality of Timon, State of Maranhão, Brazil. The owner reported abortus, births of weak calves, and mortality of adult animals with progressive weight loss. Visits to the property were carried out to obtain the history, realize animal examination and blood collection for the Woo test, hemograms, serological tests for trypanosomiasis, leptospirosis, and neosporosis and PCR for molecular diagnosis of Trypanosoma vivax. The identification of animals with low values in the hematocrit was the main hematological alteration identified in the herd. Two animals were positive in the Woo test and trypanosomes were visualized in blood smears, confirmed by molecular diagnosis as T. vivax. It was identified that 95.23% (40/42) of the animals with low hematocrit were serologically positive for T. vivax. The conditions identified in the property as an environment propitious to mechanical vectors, the presence of wild animals and the introduction of animals from states where trypanosomiasis outbreaks had already been reported were probably associated with the introduction and dissemination of the agent in the herd. The high number of serologically positive animals for trypanosomiasis 82.51% (151/183) shows that almost all the herd had contact with the agent. The rapid establishment of control measures, including the use of trypanocidal drugs, contributed to the control of the outbreak. The study allowed confirming the occurrence of another outbreak of trypanosomiasis in Brazil. The clinical diagnosis of the disease was difficult by the similarity of the clinical signs of trypanosomiasis with other diseases and the possibility of association of two or more diseases in the same patient, which emphasizes the importance of establishing adequate diagnostic measures as a way to avoid the dissemination of the disease and to minimize the economic losses of the producers.(AU)

Risk factors for trypanosomiasis by Trypanosoma vivax in cattle raised in Rio Grande do Norte state / Fatores de risco para tripanossomose por Trypanosoma vivax em bovinos criados no estado do Rio Grande do Norte

The objective of this study was to determine the prevalence of anti Trypanosoma vivax antibodies and the possible risk factors associated with the infection in cattle in Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil, through a cross-sectional epidemiological study, with non-probabilistic convenience sampling. A total of 467 cattle's serum samples were analyzed by indirect immunofluorescence. Forty-two samples tested positive for Trypanosoma vivax IgG antibodies, corresponding to the prevalence of 9%. Risk factors influencing the occurrence of trypanosomiasis were milk exploration, raising of European breeds, productivity category: lactation cow, purchase of new cattle, foraging habits near ponds and rivers, and the presence of mechanical vectors. So, high prevalence in beef animals (59.5%), females (95.2%), European breed (88.1%), lactating cows (85.7%), pasture at banks of dams and rivers (95.2%), in addition to the presence of mechanical vectors (81%) and acquisition of animals (88.1%), indicates the expansion of trypanosomiasis in Northeastern semi-arid region, and the information obtained may explain the epidemiological factors that determine the occurrence of trypanosomiasis by T. vivax in this region.(AU)

Objetivando determinar a prevalência de anticorpos anti-Trypanosoma vivax e os possíveis fatores de risco associados à infecção em bovinos no estado do Rio Grande do Norte, nordeste do Brasil, o trabalho consistiu em um estudo epidemiológico transversal, com amostragem não probabilística por conveniência, no qual foram analisadas, por meio da reação de imunofluorescência indireta, 467 amostras de soro sanguíneo de bovinos. Das amostras testadas, 42 foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax, o que correspondeu à prevalência de 9,0%. Os fatores de risco que influenciaram a ocorrência da tripanossomose foram: exploração com finalidade do tipo leite, criação de bovinos de raça europeia, categoria animal vaca em lactação, aquisição de animais, forrageamento das margens de açudes e rios, além da presença de vetores mecânicos. A alta prevalência encontrada em animais de corte (59,5%), fêmeas (95,2%), raça europeia (88,1%), vacas em lactação (85,7%), pastagem a margens de açudes e rios (95,2%), além da presença de vetores mecânicos (81%) e aquisição de animais (88,1%), indica a expansão da tripanossomose no semiárido do Nordeste, e as informações obtidas poderão esclarecer os fatores epidemiológicos que determinam a ocorrência da tripanossomose por T. vivax na região.(AU)

Detection and molecular characterization of Trypanosoma (Duttonella) vivax in dairy cattle in the state of Sergipe, northeastern Brazil / Detecção e caracterização molecular de Trypanosoma (Duttonella) vivax em gado leiteiro no estado de Sergipe, no Nordeste do Brasil

Abstract Trypanosoma (Duttonella) vivax is an important cause of economic losses among feedlot cattle. These losses are related to the morbidity, mortality, reproductive issues and decreased production. It is known that the clinical signs observed in infections by this protozoon are similar to other hemoparasitosis, which difficult the diagnosis. Therefore, the aim of this study was to detect and molecularly characterize an outbreak of trypanosomiasis caused by T. (D.) vivax in dairy cattle in the municipality of São Miguel Aleixo, state of Sergipe, Brazil. Blood samples from cattle (n = 15) presenting clinical signs compatible with trypanosomiasis were collected and parasitological and molecular evaluated. Among the samples analyzed, 34% (5/15) were positive from blood smears, 60% (9/15) from the buffy coat method and 80% (12/15) from the molecular method. The DNA sequence obtained (659 bp) showed 99% similarity to T. (D.) vivax sequences that are available in the GenBank database. The presence of this protozoon in cattle herds is a problem for producers. Diagnosing trypanosomiasis is problematic because its evolution is similar to that of other parasitic blood diseases. In addition, this is the first report of infection by T. (D.) vivax in cattle in the state of Sergipe, northeastern Brazil.

Resumo Trypanosoma (Duttonella) vivax é responsável por consideráveis perdas econômicas na bovinocultura. Estas perdas estão relacionados à morbidade, mortalidade, problemas reprodutivos e declínio na produção. Sabe-se que os sinais clínicos apresentados em infecções por este protozoário se assemelha a outras hemoparasitoses, dificultando muitas vezes o diagnóstico. Portanto, objetivou-se com este estudo detectar a ocorrência de T. (D.) vivax em bovinos leiteiros no município de São Miguel Aleixo, Estado de Sergipe, Brasil. Para tanto, amostras de sangue (n = 15) foram coletadas e avaliadas através de métodos parasitológicos e moleculares. Do total das amostras analisadas, 34% (5/15) foram positivas no esfregaço sanguíneo, 60% (9/15) pelo método do Buffy Coat, enquanto na biologia molecular 80% (12/15) amplificaram um fragmento de DNA (659 pb) compatível com T. (D.) vivax (GenBank). Em conclusão a presença de T. (D.) vivax nos rebanhos bovinos caracteriza-se como um problema para os pecuaristas, como também para o diagnóstico, uma vez que essa tripanossomíase apresenta evolução semelhante a outras hemoparasitoses. Ademais, este é o primeiro relato de infecção por T. (D.) vivax em bovinos do estado de Sergipe, nordeste do Brasil.

First outbreak and subsequent cases of Trypanosoma vivax in the state of Goiás, Brazil / Primeiro surto e casos subsequentes de Trypanosoma vivax no Estado de Goiás, Brasil

Abstract Trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax has increased the reports in Brazil in the last decade. An outbreak is herein first reported in the state of Goiás, from May 2016 to January 2017. The outbreak start occurred in the city of Ipameri (Goiás) after the introduction of 18 auctioned cows from the state of Minas Gerais. Direct parasitological test (blood smears) and polymerase chain reactions targeting the catL genes diagnosed T. vivax infection. Fifty six cows from a herd of 161 were infected; 12 died during the outbreak and 44 animals persistently positive (by blood smears) even after chemical treatment were discarded. After this first case, five other cases were detected in state of Goiás. The spread of this disease can be linked to the commercialization of animals carrying T. vivax, allied to the iatrogenic transmission practice, using a single needle and syringe for all cows, during oxytocin administration before each milking.

Resumo Tripanossomíase causada por Trypanosoma vivax tem sido reportada em várias regiões do Brasil na última década. Um surto é aqui reportado no Estado de Goiás, de maio de 2016 a janeiro de 2017. O início do referido surto ocorreu na cidade de Ipameri (Goiás) depois da introdução de 18 vacas Girolando, provenientes do Estado de Minas Gerais. Pelo exame parasitológico direto (esfregaço sanguíneo) e pela reação em cadeia pela polimerase, identificou-se a infecção por T. vivax nos animais. Cinquenta e uma vacas de um rebanho de 161 foram infectadas; 12 morreram durante o surto e 44 animais permaneceram positivos (pelo esfregaço sanguíneo) mesmo recebendo tratamento químico (diminazene), e foram descartadas. Após esse primeiro caso, foram detectados outros cinco casos no Estado de Goiás. A disseminação dessa doença pode estar ligada à comercialização de animais portadores de T. vivax, aliada à prática de transmissão iatrogênica, utilizando-se uma única agulha e seringa para, todas as vacas, durante a administração da oxitocina antes de cada ordenha.

Evaluation of clinical signs, parasitemia, hematologic and biochemical changes in cattle experimentally infected with Trypanosoma vivax / Avaliação dos sinais clínicos, parasitemia e alterações hematológicas e bioquímicas de bovinos experimentalmente infectados peloTrypanosoma vivax

Abstract Infections by Trypanosoma vivax cause great losses to livestock in Africa and Central and South Americas. Outbreaks due this parasite have been occurred with increasing frequency in Brazil. Knowledge of changes caused byT. vivax during the course of this disease can be of great diagnostic value. Thus, clinical signs, parasitemia, hematologic and biochemical changes of cattle experimentally infected by this hemoparasite were evaluated. Two distinct phases were verified during the infection – an acute phase where circulating parasites were seen and then a chronic phase where fluctuations in parasitemia were detected including aparasitemic periods. A constant reduction in erythrocytes, hemoglobin and packed cell volume (PVC) were observed. White blood cells (WBC) showed pronounced changes such as severe neutropenia and lymphopenia during the acute phase of the illness. Decreases in cholesterol, albumin, aspartate aminotransferase (AST), lactate dehydrogenase (LDH), and increases in glucose, globulin, protein, and alkaline phosphatase (ALP) were observed. The “Lins” isolate of T. vivax showed pathogenicity for cattle, and intense parasitemia was detected in the early stages of infection. Circulating parasites were detected for about two months. The most evident laboratory abnormalities were found in WBC parameters, including thrombocytopenia.

Resumo Infecções pelo Trypanosoma vivax causam grandes prejuízos à pecuária na África e Américas Central e do Sul. Surtos devido a este protozoário têm ocorrido com frequência cada vez maior no Brasil. O conhecimento das alterações provocadas pelo T. vivax durante a evolução desta enfermidade podem ser de grande valia para o auxílio no diagnóstico. Para tanto foram estudados os sinais clínicos, parasitemia, alterações hematológicas e bioquímicas em bovinos experimentalmente infectados por este hemoparasito. Foram verificadas duas fases distintas durante a infecção, uma aguda onde parasitos circulantes foram vistos durante todo o período, e posteriormente uma crônica, onde foram detectadas flutuações na parasitemia, com períodos aparasitêmicos. Foi verificada constante diminuição da contagem global de eritrócitos, teor de hemoglobina e volume globular (VG). O leucograma revelou leucopenia por neutropenia e linfopenia durante a fase aguda da enfermidade. Foram observados diminuição do colesterol, albumina, aspartato aminotransferase (AST), lactato desidrogenase (LDH) e aumento da glicose, globulinas, proteínas e fosfatase alcalina (FA). O isolado “Lins” de T. vivax apresentou patogenicidade para bovinos, verificando-se parasitemia intensa nos estágios iniciais da infecção, sendo detectados parasitas circulantes por aproximadamente dois meses. As alterações laboratoriais mais evidentes foram encontradas nos parâmetros do leucograma, ainda destacando-se um quadro de trombocitopenia.

Detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos através do teste de Imunofluorescência indireta / Detection of IgG antibodies against Trypanosoma vivax in cattle by indirect immunofluorescence test

Trypanosoma vivax infecta uma grande variedade de animais ungulados selvagens e domésticos, podendo causar grande impacto na produção de ruminantes. Este trabalho teve como objetivo avaliar a detecção de anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax em bovinos provenientes do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, foram analisadas 2,053 amostras de soro sanguíneo de bovinos provenientes de rebanhos de municípios do estado de Pernambuco, os quais foram analisados através da Reação de Imunofluorescência Indireta. Das amostras testadas 13,93% (286/2.053) foram reagentes para anticorpos IgG anti-Trypanosoma vivax. As freqüências, por mesorregião, variaram de 11,90% a 15,99%. Assim, os dados obtidos permitiram a caracterização do estado de Pernambuco como uma área de instabilidade enzoótica e sugere que o estado Pernambuco é área endêmica para Trypanosoma vivax e este parasito está distribuído por todo o estado.

Trypanosoma vivax infects a wide range of wild and domestic ungulates, causing important losses for the livestock industry. The aim of the present study was to assess the detection of IgG antibodies against T. vivax in cattle from the state of Pernambuco, Brazil. Therefore, we analyzed 2.053 blood serum samples from cattle herds of municipalities in Pernambuco, what was made by Immunofluorescence Assay. The overall seroprevalence of IgG antibodies against T. vivax in cattle was 13.93% (286/2053). The frequencies, by region, varied from 11.90% to 15.99%. Thus, the data obtained allowed to characterize the state of Pernambuco as an area of enzootic instability for T. vivax. The frequency herein reported (i.e., 13.93%) indicates that Pernambuco is an endemic area for T. vivax, this parasite being spread throughout the state.

Acute phase proteins: a potential approach for diagnosing chronic infection by Trypanosoma vivax / Proteínas de fase aguda: uma possível abordagem para diagnóstico de infecção crônica por Trypanosoma vivax

The present study aimed to assess potential changes in acute phase proteins in sheep experimentally infected with Trypanosoma vivax. There were studied eight male sheep, four used as controls and four infected with 10(5) T. vivax trypomastigotes. Blood samples were collected at two points times before infection and then at 5,7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 and 120 days post-infection (dpi). Blood samples were centrifuged and allotted, and acute phase proteins were then separated by electrophoresis on acrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate. Protein concentrations were determined by computer-assisted densitometry. Total protein was determined by colorimetric biuret method. Trypanosomes were counted daily using a 5 mL aliquot of blood smear on a glass slide under a 22 × 22 mm coverslip. Parasites were counted in 100 microscopic fields (40× magnification), and then multiplied by a correction factor. The results were expressed as parasites per mL of blood. For statistical analyses, we used the Wilcoxon test at 5% significance level. There was found a reduction in several acute phase proteins and increase in antitrypsin and transferrin. This finding can be used for the diagnosis of T. vivax infection, especially in chronic infection.

O objetivo do presente estudo foi verificar possíveis alterações nas proteínas de fase aguda em ovinos infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax. Para tanto, foram utilizados oito ovinos machos, sendo quatro usados como controle e quatro infectados com 10(5) tripomastigotas de T. vivax. Colheram-se amostras de sangue em dois tempos antes da infecção e, posteriormente, aos 5, 7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 e 120 dias após a infecção (dpi); após centrifugação e aliquotização das amostras. As proteínas de fase aguda foram separadas por eletroforese em gel de acrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio, e suas concentrações foram determinadas através de densitometria computadorizada. A dosagem de proteína total foi realizada pelo método colorimétrico do biureto. A contagem dos tripanossomas foi realizada diariamente, utilizando-se uma alíquota de 5 µL de sangue disperso em lâmina de microscopia, sob lamínula de 22 × 22 mm, contando-se os parasitos em 100 campos microscópicos, com objetiva de 40×, multiplicados pelo fator de correção do microscópio, e o resultado expresso em parasitos por mL de sangue. Para a análise estatística, empregou-se o teste de Wilcoxon a 5% de probabilidade. Foi observada a diminuição de diversas proteínas de fase aguda e aumento de antitripsina e transferrina que podem ser utilizadas para auxiliar no diagnóstico da infecção por T. vivax, principalmente na fase crônica da infecção.

First report of Trypanosoma vivax outbreak in dairy cattle in São Paulo state, Brazil / Primeiro relato de surto por Trypanosoma vivax em vacas leiteiras no estado de São Paulo, Brasil

This is the first description of a Trypanosoma vivax outbreak in the state of São Paulo (municipality of Lins). Fever, jaundice, decreased milk production, weight loss, profuse diarrhea, abortion, anemia, leukocytosis and hyperfibrinogenemia were observed in the affected animals. Thirty-one cows and calves died out of a total of 1080 in the herd. Three cows showed neurological symptoms like dysmetria, ataxia, muscle weakness, ptyalism, lymph node enlargement and submandibular edema. Flagellated hemoparasites were observed in blood smears. The species was diagnosed as T. vivax by means of PCR. This T.vivax strain showed resistance to diaminazene aceturate and the infection spread quickly at the herd. From the ELISA test, 599 serum samples (98.36%) were positive for anti-T.vivax IgG antibodies. This outbreak occurred during a very dry period, which indicates that other factors were involved in the outbreak, such as absence of tabanids and large populations of Haematobia irritans and Stomoxys calcitrans. The increases in these populations may have been due to the use of biosolid waste from sugar and ethanol plants in the sugarcane plantations surrounding the dairy farm.

Esta é a primeira descrição de um surto de Trypanosomavivax ocorrido no Estado de São Paulo, no município de Lins. Animais acometidos apresentaram febre, icterícia, diminuição da produção de leite, perda de peso, diarreia profusa, abortos, anemia, leucocitose e hiperfibrigenemia. Foram registrados 31 óbitos de vacas e bezerros em 1.080 bovinos no total. Três vacas apresentaram sintomatologia nervosa, como dismetria, ataxia e fraqueza muscular, além de ptialismo, aumento de linfonodos e edema submandibular. Hemoparasitas flagelados foram observados em esfregaços sanguíneos, e a espécie de tripanossomo foi diagnosticada como T.vivax por PCR. A cepa de T. vivax mostrou ser resistente ao tratamento com aceturato de diaminozeno e a infecção disseminou rapidamente no rebanho. Pelo ELISA, observou-se que 98,36% (599) das amostras de soro colhidas apresentaram títulos positivos para IgG anti-T.vivax. O surto ocorreu em condições de baixa precipitação pluviométrica, fato que indica que outros fatores estavam envolvidos na ocorrência desse surto, como a ausência de tabanídeos e a grande presença de Haematobia irritans e Stomoxys calcitrans, cujo aumento populacional pode ser devido ao uso de resíduos de usinas de açúcar e álcool nos canaviais que circundavam a granja leiteira.

Aplicación de las pruebas dePCR convencional simple y múltiple para la identificación de leptospira spp en Colombia

Introducción: debido a las dificultadas asociadas con la identificación serológica de aislamientosde Leptospira ssp, se genera gran interés en la pruebas moleculares por su poder discriminatorio, reproducibilidad y fácil interpretación (1).Objetivo: aplicar y validar la prueba de PCR convencional,usando dos pares de iniciadores descritos previamente y dirigidos a los genes lipL3 (2) (PCR simple) y sec y (3) /flaB (4) (PCR múltiple), conel fin de evaluar su aplicación para identificar especies patógenas y saprófitas de Leptospira ssp.Materiales y métodos: Para la estandarizaron de las pruebas de PCR se usaron 22 cepas de referenciainternacional y 12 aislados colombianos.Se determinó el nivel de detección de cada pareja de iniciadores, su especificidad frente a otrosmicroorganismos causantes de enfermedades endémicas en Colombia y su capacidad de identificar especies dentro del grupo de Leptospira.Resultados: el límite de detección de la PCR simple lipL32 fue una dilución 1: 10 000 y para la PCR múltiple secY/flaB fue una dilución 1:100para el gen secY y 1: 1 000 para flaB. La especificidad de todos los iniciadores fue de 100 %. La PCR simple lipL32, mostró amplificado específicopara todas las cepas de referencia patógenas mientras que la PCR multiple secY/flaB lo fue para 18 cepas. De los 12 aislados colombianos, sietefueron positivos por PCR lipL32 y seis lo fueron por PCR secY/flaB.Conclusiones: Los resultados más consistentes fueron obtenidos con la PCR simple lipL32 tanto en límite de detección, especificidad yutilidad para la identificación de Leptospira spp. Estos resultados muestran las potencialidadesde esta prueba para que se valide posteriormente su utilidad en el diagnóstico molecular de leptospirosis en muestras clínicas o ambientales(5-7).

Estudio de vectores detripanosomosis bovina en el bajo cauca antioqueño

La tripanosomosis bovina es unenfermedad causada por el protozoo Trypanosoma vivax, afecta a bovinos, ovinos y búfalos. Estaenfermedad causa grandes pérdidas económicas debidas a abortos, disminución en la producciónde leche y altos costos en tratamiento veterinario.El T. vivax fue introducido a Suraméricaa través de animales traídos del África, donde lamosca Glossina es el vector biológico del hemoparásito.En Colombia, T. vivax se ha adaptadoa nuevas condiciones ambientales y ecológicas,causando infecciones endémicas en el ganado de zonas cálidas. Muchos aspectos epidemiológicosson aún desconocidos. El propósito delestudio fue identificar los posibles vectores de la tripanosomosis bovina y registrar la densidady la diversidad de tábanos en la zona.

Caracterización molecular de Trypanosoma vivax en ovinos naturalmente infectados en dos hatos de los municipios San Fernando y Biruaca estado Apure Venezuela / Molecular characterization of Trypanosoma vivax in naturally-infected sheep from two farms at San Fernando and Biruaca municipalities Apure state Venezuela

Este estudio tuvo como objetivo efectuar una caracterización molecular de Trypanosoma vivax en ovinos de dos hatos en los cuales estos rumiantes, conjuntamente con vacunos y búfalos de agua, comparten la misma área agroecológica, estableciendo el potencial papel de los ovinos como fuente de infección de tripanosomosis por T. vivax para los grandes rumiantes. La técnica de microcentrifugación capilar (TMC) fue usada para establecer el porcentaje de infecciones activas por tripanosomas existente en los animales evaluados. Se empleó un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para confirmar la identificación de especie, mientras que un ensayo de PCR-RFLP (polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción) permitió evaluar la variabilidad intraespecífica entre los aislados de T. vivax detectados en ovinos vs. aquellos provenientes de bóvidos (vacunos y búfalos de agua), colectados en la misma área de producción. De las 320 muestras de sangre de ovinos colectadas, la TMC detectó positividad en 11 (4,35 por ciento), lo que es de gran relevancia epidemiológica debido a la baja sensibilidad de esta metodología. Los resultados de PCR permitieron caracterizar a T. vivax como la especie presente en todas las infecciones activas detectadas. Todos los animales infectados mostraron un valor de hematocrito inferior (P<0,05) al registrado en animales no infectados (22,435 vs. 31,450). El ensayo de PCR-RFLP permitió observar la existencia de perfiles de restricción similares entre los aislados de T. vivax evaluados, sugiriéndose la ausencia de variación intraespecífica para el marcador molecular en estudio, independientemente del origen de hospedador del que provino la muestra (ovinos, vacunos, búfalos de agua). Estos resultados permiten sugerir que los aislados de T. vivax que infectan ovinos, vacunos y búfalos de agua en el área de estudio pudiesen estar estrechamente relacionados desde un punto de vista genético y, consecuentemente...

This study was made to achieve a molecular characterization of Trypanosoma vivax in two Venezuelan farms where both small ruminants (mainly ovines) and bovines (cattle and water buffaloes) share the same agroecological area. In addition, it was made to assess the role of sheep as source of T. vivax infection for cattle and buffalo herds. The microhematocrit centrifugation technique (MHC) was used to establish the percentage of current trypanosome infection. A PCR-based assay was used to confirm the species identification while a PCR-RFLP assay was used for studying intra-specific variation among T. vivax from sheep vs. those from other livestock from the same area. From 320 sheep blood samples, MHC detected 11 (4,35 percent) which is of remarkable epidemiological significance due to the low sensitivity of this method. Based on PCR results, T. vivax was characterized as the only species responsible for all sheep infections. All infected animals showed a lower packed cell volume value (P<0,05) when compared with the non-infected (22,435 vs. 31,450). The PCR-RFLP technique revealed similar profiles among T. vivax isolates suggesting a non intra-specific variation within the molecular marker amplified regardless the host (sheep water buffaloes or cattle). Thus, it was suggested that T. vivax infecting sheep, cattle, and buffaloes in the study area could be genetically closely related. These findings show that sheep may play an important role in the epidemiology of livestock trypanosomiasis in this area and they might be incorporated into therapeutic and preventive programs against livestock trypanosomiasis.

Tiempo de supervivencia in vivo y criopreservación de Trypanosoma vivax / In vivo survival time and cryopreservation of Trypanosoma vivax

Uno de los problemas más comunes del trabajo con Trypanosoma vivax, es la supervivencia y criopreservación de este protozoario, lo cual origina pérdida de aislados de campo y errores en exámenes parasitológicos. Se propone evaluar la supervivencia in vivo en condiciones de campo y criopreservación de T. vivax. Para determinar la supervivencia, la sangre se sometió a temperatura ambiente y refrigeración a 4°C, luego se determinó la sobrevivencia en el tiempo. Para el estudio de criopreservación, se emplearon dos crioprotectores de diferente naturaleza química: glicerol 10 por ciento y DMSO 5 por ciento de concentración final. Además, la criopreservación se realizó bajo tres condiciones de almacenamiento en nitrógeno líquido: 1) fase gaseosa 2) líquida y 3) combinación de ambas. Durante la evaluación de la supervivencia, se observó que la sobrevivencia de T. vivax en sangre refrigerada disminuyó significativamente (P<0,01), en comparación con aquellas sometidas a temperatura ambiente. Sin embargo, la sobrevivencia de éstos últimos comienza a disminuir luego de 6 horas, aunque algunos hemoparásitos permanecieron viables hasta 24 horas post-recolección. Para evaluar la criopreservación, al cabo de dos semanas, se descongelaron los crioviales, se determinó la sobrevivencia, resultando negativas las muestras sometidas a congelamiento directo en fase líquida. Los otros dos métodos empleados, resultaron similares (estadísticamente no significativos), el glicerol 10 por ciento resultó con mayor número de parásitos viables. En conclusión, se determinó que, las muestras infectadas con T. vivax deben evaluarse antes de 8 horas post-recolección y mantenerlas a temperatura ambiente. Por otra parte, el congelamiento debe realizarse en primera instancia en fase gaseosa o combinación gaseosa/líquida, empleando glicerol 10 por ciento. Estos resultados, permiten sugerir la mejor metodología a ser empleada para la supervivencia de los parásitos antes de exámenes parasitológicos...

One of the common problems working with Trypanosoma vivax is its survival and cryopreservation, which originates loss of field isolates and parasitological examinations mistakes. The aim of this paper was to study the best methodologies for in vivo survival under field conditions and cryopreservation of the T. vivax. In order to study complete blood survival of T. vivax, two surviving conditions were tested at: room temperature and refrigeration at 4°C. The result shows that surviving in cooled sampled diminished significantly (P<0.01) compare with room temperature. Nevertheless, surviving of room temperature parasite begins to diminish after 6 hours, although some parasites remained viable up to 24 hours post-harvesting. Cryopreservation studies were made under three liquid nitrogen storage conditions: 1) gaseous phase 2) liquid and 3) gaseous/ liquid phase combination (glycerol 10 percent and DMSO 5 percent, were used as cryoprotectants). After two weeks and defrost the survive of T. vivax from cryovials determined. The result show that: a) direct freezing in liquid phase samples were negative and b) the other two methodology were positive and statistically similar, glycerol 10 percent resulted with the greatest number of viable parasites. In conclusion, these results suggest that the best methodologies for conservation under field conditions, were that the samples infected with T. vivax must be evaluated before 8 hours post-harvesting at room temperature and cryopreservation condition of the T. vivax, must be made in gaseous phase or gaseous/liquid phase combination.

Explorando o transcriptoma de Trypanossoma vivax / Exploring the transcriptome of Trypanosoma vivax

Trypanosoma vivax foi descrito por Zieman, (1905) do sub-gênero Dutonella, família Trypanosomatidae, é um protozoário patogênico causador de tripanossomose na África e na América Latina. Infecta bovinos, ovinos e outros mamíferos silvestres, não infecta o homem e equinos. Os principais sinais clínicos são: anemia, perda de apetite, efeitos na fertilidade, no sistema nervoso central, aborto e até á morte. Transmitido pela mosca tsétsé e tabanídeos, causa grandes perdas econômicas na pecuária. No Brasil, surtos tem sido relatados em Belém- PA, Calçoene-AP, no Pantanal (MS e MT) e Catolé da Rocha-PB. Apesar do impacto econômico relevante e importância médico-veterinária, há pouco conhecimento sobre sua biologia e genoma. Um fator limitante é a dificuldade de cultivo in vivo e in vitro. Com o intuito de obter informações sobre quais genes estão sendo transcritos e realizar uma análise comparativa com a cepa africana Y486, foram sequenciados mais de 4208 clones de cDNAs de um isolado do Pantanal-Brasil VTA-01 de T. vivax e 768 clones genômicos da cepa africana Y486. As sequências foram armazenadas e analisadas no sistema STINGRAY (http://stingray.biowebdb.org/). Após remoção das sequências de baixa qualidade e agrupamento foram analisadas 2557 ESTs e 81 GSSs, com tamanho médio de 497 pb e 500 pb e conteúdo G+C de 43% e 55%, respectivamente. Após pesquisa de similaridade usando diferentes programas como BLAST, RPS-Blast, InterProScan e HMMER, 77% (1746/2638) apresentaram hit. Os principais domínios encontrados foram NADH, RhoA, Rac1 GTPases e Drf_FH1. Usando o programa RepeatMasker foram encontrados as repetições (CA)n, (GA)n e (TA)n e os retrotransposons SINE e LINE. Um total de 217 ESTs espécie-específicas para T. vivax foram identificadas e apresentaram preferencialmente A ou T na terceira posição do codon nas regiões codificantes (CDSs). Destas 88% (191/217) possuem índice RCBS 0,5, com alto nível de expressão e 12% (26/217) RCBS menor 0,5 com baixo nível de expressão. Os genes altamente expressos foram associados com vias de duplicação do DNA, transcrição, tradução, organização celular e formação de actina no citoesqueleto. A localização de domínios G-quadruplex foram encontrados tanto dentro quanto fora da CDS e próximas as extremidades 5’ e 3’ das CDSs e dos ESTs. Nas análises comparativas, a proteína extensina está presente no isolado VTA-01 e cepa Y486 de T. vivax. Aproximadamente 83% das ESTs validaram sequências do projeto genoma de T. vivax. As informações geradas neste projeto irão contribuir para um melhor conhecimento sobre a biologia deste parasita.